Il tRNA di inizio localizzato nel sito P della grande subunità ribosomale che si associa alla piccola subunità ribosomale, la quale è a  sua volta associata al mRNA. Per complementarità tra anticodone e codone la grande subunità ribosomale si posiziona a formare il ribosoma in corrispondenza del codone di inizio. Il sito "A" è libero e può accogliere il tRNA complementare alla tripletta successiva.

Gli enzimi presenti nella grande subunità ribosomali catalizzano la formazione del legame peptidico tra la catena nascente (Growing polypeptide) agganciata al ribosoma dal tRNA dell'ultimo amino acido inserito posizionato nel sito P e l'amino acido successivo (next amino acid to be added) posizionato nel sito A perché possiede un anticodone complementare al codone della tripletta successiva. Mentre si realizza il legame peptidico, il tRNA che diventa associato alla catena polipeptidica si sposta dal sito A al sito P e quello precedente che non è più associato alla carena polipeptidica si sposta dal sito P al sito E prima di lasciare definitivamente il ribosoma.