Mutagenesi USE

Elimina il sito di restrizione unico.
Primer Usa a causa: il primo Viene detto primer mutagenico, in quanto è il responsabile dell'introduzione della Mutazione, il secondo elimina il sito unico nel plasmide.
Heteroduplex: lo stampo ha il sito di restrizione, mentre il filamento nuovo ha la Mutazione, ma non il sito di restrizione.
Incubazione con enzima. si ottiene la linearizzazione di peso, ma non dell'heteroduplex.
Trasformazione in ceppo di E. Coli che non effettua la riparazione (BMH71-18 DNA muts lineare Trasforma 10-1000 volte di più Rispetto al circolare) si ottiene la replicazione dell'heteroduplex.
Seconda digestione e trasformazione nel ceppo di E. Coli normale (mutati 5-50%).