Task N.7: site-directed mutagenesis


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Transposons

MsoNormal">Transposons are mobile genetic elements that can move from one site to another in the genome. This transposition can cause mutations and change the amount of DNA in the genome. Transposons were also once called "jumping genes", and are examples of mobile genetic elements. Class I mobile genetic elements, or retrotransposons, copy themselves by first being transcribed to RNA, then reverse transcribed back to DNA by reverse transcriptase, and then being inserted at another position in the genome. Class II mobile genetic elements move directly from one position to another using a transposase to "cut and paste" them within the genome. Although the procedure for in vitro mutagenesis using transposons is widely used, mutations in DNA are not site specific, as in other techniches.


La trasposizione non consente una mutagenesi sito-specifica. I trasposoni sono segmenti di DNA che si spostano da un punto di un cromosoma (sito donatore) ad un altro nello stesso o in un altro cromosoma (sito bersaglio).

Non è necessaria alcuna omologia di sequenza perchè avvenga la trasposizione: la nuova posizione viene scelta in modo casuale, non è corretto quindi parlare di mutagenesi sito-specifica, bisognerebbe parlare di mutagenesi random.

I trasposoni eucarioti assomigliano nella struttura ai loro corrispondenti batterici e, come i trasposoni batterici, possono provocare mutazioni quando si inseriscono nei geni strutturali o nelle regioni del promotore. Tuttavia, essi differiscono dai trasposoni batterici per una caratteristica molto interessante: negli eucarioti molti trasposoni sono copiati in RNA e poi di nuovo in DNA prima del loro inserimento in un nuovo punto del DNA cromosomico. La scoperta fu sorprendente perché in precedenza si pensava che la trascrizione inversa fosse un'esclusiva dei retrovirus.

Un trasposone quando si inserisce in un cromosoma può rendere inattivo un gene in quanto attraverso l'enzima trasposasi può inserirsi in un qualsiasi punto del cromosoma e quindi anche interrompere un gene strutturale e renderlo inattivo. Inoltre un trasposone complesso può anche trasportare con sè e quindi inserire nel cromosoma un gene estraneo come ad esempio quello della resistenza ad un antibiotico.