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PCR-mediated overlap extension can create specific nucleotide mutations or generate chimeric gene products.


Figure a illustrates....

1. una volta scelto il nucleotide da modificare usiamo i primers c e b che contengono il nucleotide diverso da inserire.

2. si conducono 2 reazioni di PCR in parallelo: una con i primers a e b e una con i primers c e d

3. mescolando i prodotti di reazione, tra i prodotti del reannealig, ci sarà il segmento AB che si appaia con CD nella zona mutata.

$. La PCR estende a partire dall'estremità 3' e con i primers a e d si ottiene il segmento AD contenente il nucleotide mutato 





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Figure b illustrates.......
1- Conduciamo in parallelo due reazioni di PCR su due sequenze di DNA non fisicamente unite tra loro: una con i primers a e b, l'altra con i primers c e d. I primes b e c sono solo parzialmente complementari al 5' al filamento di DNA stampo per cui la reazione di PCR produce segmenti di DNA con estremità adesive.

2- Fusione delle sequenze di DNA generate nella prima tappa mediante le estremità complementari dei primers c e d.

3- Reazione di PCR per amplificare i prodotti di fusione utilizzando i primers a e d.

4- Inserimento del gene chimera in un vettore di espressione per assicurarci di aver ottenuto il risultato voluto.





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