Report AIA
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VETRINI
Colorazione
I vetrini vengono prelevati dalla piastra e appoggiati su due vetrini portaoggetti ricoperti di Parafilm. Si incubano i vetrini con PBS Triton (0,3%) per 15 min in modo da rendere le membrane delle cellule più permeabili.
Una volta tolto PBS Triton viene aggiunto un colorante diverso a ciascun vetrino:
-ad uno il Sytox Green, che si lascia incubare 10 min al buio e serve per colorare i nuclei delle cellule;
-all'altro la Falloidina che si lascia incubare per 20 min al buio e serve per colorare l'actina (e quindi tutta la cellula).
Il Sytox Green e la Falloidina dopo l'incubazione vengono tolti e si fanno due lavaggi con PBS. I vetrini vengono spostati su due vetrini portaoggetti sui quali è stato precedentemente aggiunto il montante. I vetrini vengono rigirati affinchè le cellule si fissino tra vetrino e vetrinoportaoggetto.
Il tutto viene messo ad asciugare per un paio d'ore e poi conservato in frigo.
Una volta tolto PBS Triton viene aggiunto un colorante diverso a ciascun vetrino:
-ad uno il Sytox Green, che si lascia incubare 10 min al buio e serve per colorare i nuclei delle cellule;
-all'altro la Falloidina che si lascia incubare per 20 min al buio e serve per colorare l'actina (e quindi tutta la cellula).
Il Sytox Green e la Falloidina dopo l'incubazione vengono tolti e si fanno due lavaggi con PBS. I vetrini vengono spostati su due vetrini portaoggetti sui quali è stato precedentemente aggiunto il montante. I vetrini vengono rigirati affinchè le cellule si fissino tra vetrino e vetrinoportaoggetto.
Il tutto viene messo ad asciugare per un paio d'ore e poi conservato in frigo.