• This activity is a wiki dedicated to the methods that can be used for site-directed mutagenesis.
• You can add information and make corrections to the text inserted by others.
• Your partecipation to this wiki will be evaluated.
• Note: If you wand to add a link to a new page just type the word to be linked between these tags: [xxx] and a new page will be created automatically.
• Once linked, please do not change name of the linked page elsewhere you will loose the link!!!!
  

Mutagenesi USE

• Elimina il sito di restrizione unico.
• Primer Usa a causa: il primo Viene detto primer mutagenico, in quanto è il responsabile dell'introduzione della Mutazione, il secondo elimina il sito unico nel plasmide.
• Heteroduplex: lo stampo ha il sito di restrizione, mentre il filamento nuovo ha la Mutazione, ma non il sito di restrizione.
• Incubazione con enzima. si ottiene la linearizzazione di peso, ma non dell'heteroduplex.
• Trasformazione in ceppo di E. Coli che non effettua la riparazione (BMH71-18 DNA muts lineare Trasforma 10-1000 volte di più Rispetto al circolare) si ottiene la replicazione dell'heteroduplex.
• Seconda digestione e trasformazione nel ceppo di E. Coli normale (mutati 5-50%).