Elimina sito di restrizione unico.

Primer Usa a causa, il primo Viene detto mutagenico primer ed è Mutazione della responsabile dell'introduzione, il secondo elimina il sito unico nel plasmide.

Heteroduplex: lo stampo ha il sito di restrizione, filamento nuovo ha la mutazione, ma non il sito di restrizione.

Incubazione con l'enzima, si ottiene la linearizzazione di wt, ma non dell'eteroduplex.

Trasformazione in ceppo di E.Coli che non effettua la riparazione (BMH71-18 mutS DNA linere trasforma 10-1000 volte meno rispetto al circolare). si replica l'eteroduplex.

seconda digestione e trasformazione in ceppo di E.Coli normale (5-50% mutati).